0512-63061203
腺病毒載體（Adenovirus）能夠攜帶大片段外源DNA、感染分裂細胞和非分裂細胞、誘導體液和細胞免疫應答（這對于疫苗開發(fā)是有益的）、表現(xiàn)出高效率的轉(zhuǎn)導和高水平的轉(zhuǎn)基因表達、不整合細胞DNA（在細胞內(nèi)保持dsDNA游離體）。這些特性使腺病毒作為用于基因治療的轉(zhuǎn)基因載體、疫苗載體和溶瘤病毒療法中使用的載體。我們開發(fā)出一系列專有技術(shù)和試劑，從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了腺病毒包裝工藝水平。
| 目錄號 | 產(chǎn)品信息 | 規(guī)格 | 滴度 | 價格（CNY） | 生產(chǎn)時間 |
|---|---|---|---|---|---|
| H106 | 干擾腺病毒（一個干擾病毒） | 1ml | 1*1010PFU/ML | ￥4800 | 25個工作日 |
| H107 | 干擾腺病毒套餐（三個干擾病毒一個陰性對照） | 4*1ml | 1*1010PFU/ML | ￥11000 | 30個工作日 |
| H108 | 過表達腺病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1010PFU/ML | 基因長度*￥1+￥6880 | 咨詢 |
| H109 | 過表達腺病毒4000bp以下 | 1ml | 1*1010PFU/ML | 基因長度*￥1+￥6880 | 咨詢 |
| H110 | 腺病毒陰性對照 | 1ml | 1*1010PFU/ML | ￥1500 | 10個工作日 |
| 生產(chǎn)規(guī)格 | 非純化慢病毒制備服務 | 純化慢病毒制備服務 |
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| 交付內(nèi)容 |
定制病毒，按照規(guī)格交付：
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定制病毒，按照規(guī)格交付：
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對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應贈送：
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對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應選購：
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聚凝胺（Polybrene，5 mg/ml，200 ul），贈送 |
聚凝胺（Polybrene，5 mg/ml，200 ul），贈送 |
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輔助病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應選購：
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輔助病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應選購：
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| 病毒重懸液 | 腺病毒專用儲存液 | GTS緩沖液 |
| 運輸/存儲 | 干冰/-80°C，避免反復凍融 | 干冰/-80°C，避免反復凍融 |
| 推薦應用 | 體外培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)導 | 動物體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)導 |
為了更好地開展您的實驗，我們按照“對照病毒與定制病毒的生物學應用相匹配”的原則給您贈送或者推薦對照病毒。例如，如果定制病毒表達一個基因，則推薦的對照病毒表達熒光蛋白EGFP。如果定制病毒表達打靶某個基因的shRNA，則對照病毒表達一個Scramble shRNA。推薦的對照病毒信息如下表所示：
| 對照病毒 | 對照載體名稱 | 對照載體ID | 定制病毒 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
EGFP對照腺病毒，CMV啟動子 |
pAV[Exp]-CMV>EGFP |
VB010000-9299hac | 哺乳動物基因表達腺病毒（包含F(xiàn)LEX條件性表達）、哺乳動物腺病毒CRISPR系統(tǒng)、哺乳動物非編碼RNA表達腺病毒 |
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EGFP對照腺病毒，EF1A啟動子（選購） |
pAV[Exp]-EF1A>EGFP |
VB900088-2235wrm | ||||
mCherry對照腺病毒，CMV啟動子（選購） |
pAV[Exp]-CMV>mCherry |
VB010000-9300kfr | ||||
mCherry對照腺病毒，EF1A啟動子（選購） |
pAV[Exp]-EF1A>mCherry |
VB010000-9408agb | ||||
Scramble shRNA對照腺病毒，EGFP熒光 |
pAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-9300kfr | 哺乳動物shRNA干擾腺病毒 |
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Scramble shRNA對照腺病毒，mCherry熒光 |
pAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0021kwc | ||||
Scramble miR30-shRNA對照腺病毒，EGFP熒光 |
pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE |
VB010000-9350dnk | 哺乳動物miR30-shRNA干擾腺病毒 |
|||
FLEX-EGFP對照腺病毒（選購） |
pAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) |
VB010000-9327vmy | 哺乳動物基因FLEX條件性表達腺病毒 |
|||
為了更好地開展您的實驗，我們按照“輔助病毒與定制病毒的生物學應用相匹配”的原則給您推薦輔助病毒。例如，如果定制化的病毒是一個gRNA腺病毒（只表達gRNA），則需要一個表達Cas9的輔助病毒，才能進行CRISPR編輯實驗。推薦的輔助病毒信息如下表所示：
| 對照病毒 | 對照載體名稱 | 對照載體ID | 定制病毒 |
|---|---|---|---|
Cas9 腺病毒（選購） |
pAV[Exp]-CMV>hCas9 |
VB180820-1032mbq | 哺乳動物gRNA 腺病毒（不含Cas9） |
Cre腺病毒（選購） |
pAV[Exp]-CMV>Cre |
VB180308-1398jmt | 哺乳動物基因FLEX條件性表達腺病毒 |
| 步驟 | 描述 | 時間 |
|---|---|---|
 Plasmid linearization and Transfection |
我們常規(guī)使用的第一代腺病毒包裝系統(tǒng)包括1個含有缺失了E1/E3基因的腺病毒基因組序列的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒（Transfer plasmid）和1個表達E1基因的包裝細胞（adenoviral E1-expressing cell line），其包裝流程是通過內(nèi)切酶PacI將攜帶目的基因（Gene of Interest，簡稱GOI）的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒線性化。線性化的質(zhì)粒DNA隨后轉(zhuǎn)染到包裝細胞中，E1基因的表達產(chǎn)物激活轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上的腺病毒基因的表達（E3基因的缺失不影響腺病毒的包裝），產(chǎn)生重組腺病毒顆粒。此時生產(chǎn)出來的為粗制的腺病毒。 | 第1-6天 |
 Virus amplification |
粗制的腺病毒再次轉(zhuǎn)導到在包裝細胞中進行擴增。 | 第7天 |
 Concentration and purification |
對于非純化的腺病毒，腺病毒可以被細胞直接分泌到培養(yǎng)基中，然后進行收集。對于超純化腺病毒，則還需要進一步的氯化銫（CsCl）密度梯度離心進一步純化和濃縮。 | 第24天 |
 Quality Control |
對于每一個我們生產(chǎn)的腺病毒，質(zhì)量控制均包括基于免疫組化（IHC）的滴度測定（Titer determination）、微生物（細菌和真菌）檢測（Bioburden test）和支原體檢測（Mycoplasma test）。 若轉(zhuǎn)移載體同時編碼一個熒光蛋白，我們還會將病毒進行細胞轉(zhuǎn)導以測定相應的熒光表達情況（Transduction test）。此外，對于超純化腺病毒，我們還可以檢測內(nèi)毒素水平（Endotoxin test）。 | 第28天及以后 |
注意： 第三代慢病毒包裝系統(tǒng)只能包裝第三代的慢病毒轉(zhuǎn)移載體。但是第二代慢病毒包裝系統(tǒng)既能包裝第二代，也能包裝第三代的慢病毒轉(zhuǎn)移載體。第三代慢病毒轉(zhuǎn)移載體上的5’ LTR中的U3元件是被一個外源啟動子替代（如CMV啟動子或者RSV啟動子），使其不依賴Tat蛋白進行HIV RNA基因組的轉(zhuǎn)錄，故第三代慢病毒包裝系統(tǒng)的包裝質(zhì)粒不含Tat蛋白。第二代慢病毒轉(zhuǎn)移載體上的5’ LTR是野生型的LTR，含有U3、R和U5元件，依賴Tat蛋白轉(zhuǎn)錄HIV RNA基因組，故第二代慢病毒包裝系統(tǒng)的包裝質(zhì)粒含有Tat蛋白。
我們的滴度保證僅適用于包裝進病毒的區(qū)域（從5’ ITR 到3’ ITR）小于腺病毒承載限度（38.7 kb，~野生型HAd5基因組長度36 kb的108%）的載體。超過該范圍，超出的那部分序列在包入衣殼時會被剪切掉，導致包裝出來的腺病毒顆粒含有不完整的genome。此外，對于如下載體，我們同樣不能保證滴度:
